一、产品简介

本产品适用于各种哺乳动物的原代细胞及传代细胞系的冻存保种，复苏后能够有效保持细胞的存活率，并且储存稳定，操作简便。产品组分包括通用细胞冻存液BA3309，规格为100mL。储存条件为避光保存于-20℃，有效期为两年。

注意事项

1. 离心机务必使用水平离心机，并设置合适的参数，避免因操作不当影响实验结果。

2. 本产品为无菌产品，请穿戴实验服和一次性手套，确保无菌操作，以防微生物污染。

3. 使用前需确保试剂完全融化并混匀。

4. 尽量确保冻存前细胞状态良好。

自备材料

细胞冻存材料

1. 仪器：水平离心机、细胞计数仪、-80℃冰箱。

2. 耗材：细胞冻存管、程序性冻存盒、低吸附枪头。

细胞复苏材料

1. 仪器：水平离心机、水浴锅。

2. 试剂：RPMI1640培养基。

3. 耗材：酒精棉球、低吸附枪头、离心管。

使用方法

细胞冻存

1. 使用前将通用细胞冻存液完全融化并混匀。

2. 通过细胞计数仪计算出细胞总数，常见冻存密度为1x10⁶/mL。

3. 将细胞离心，弃上清，保留细胞沉淀。不同细胞类型的离心条件会有所不同，例如人PBMC细胞的离心条件为300xg，5分钟。

4. 根据细胞数量计算所需添加的细胞冻存液体积，用移液枪吸取细胞冻存液并轻轻重悬细胞。

5. 将上述细胞按体积分装至细胞冻存管并进行标记。注意：须使用专门用于液氮冻存的细胞冻存管，切勿使用普通离心管。

6. 将细胞冻存管放置于可逐步降低温度的装置，例如程序性冻存盒内，再放入-80℃冰箱，确保温度下降速度约为1℃/min。常规冻存后，24小时内可转移至液氮中，以便更长时间保存。

细胞复苏

1. 打开恒温水浴锅，设置至37℃，取一离心管，加入5mL细胞培养基，并在37℃的水浴锅中温浴至培养基达到37℃，约需2-5分钟。

2. 取出冻存管，立即放入水浴锅中快速摇晃，让冻存液快速融化。

3. 完全融化后，立即用酒精棉球擦洗冻存管外部以降低污染风险。

4. 迅速打开冻存管，一滴一滴地将冻存液添加到上述温浴好的培养基中，一边添加一边轻轻摇晃，之后放入水平离心机于4℃，300xg离心5分钟。

5. 弃去上清，添加适当体积的培养基重悬细胞。

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